ABSTRACT
ABSTRACT: The research intends to detect sources of contamination by Yersinia enterocolitica in the abattoir flowchart and endeavors to study its relation with the contamination in the farm. For this purpose, sixty pigs were followed up. In order to carry out the study, samples of faeces were collected from the animal farm, where the animals were originally kept and from the abattoir, directly from the animal's rectum, after desensitization. Additionally, samples were also collected from the carcass, after passage into the hair removal machine, after evisceration, prior to entry into the cold chambre, from the jowls, and water of the scald tank, before the commencement of the abattoir as well as after the passage of the animals. Further, the isolates were obtained through microbiological analyzes, upon being identified by PCR and compared via rep-PCR. Basically, Yersinia enterocolitica was isolated from three bays in the original farm (20 %) and from 20 samples (6.67 %), obtained in the abattoir flowchart. Comparison made via rep-PCR revealed that the contaminated pigs on the farm could carry the microorganism to different points in the abattoir flowchart. However, apart from the farm, other sources of the contamination were reported to be more frequent and diverse. Indeed, the chins and the carcass at the entrance of the cold chamber were identified as the most critical points. Therefore, we concluded that Y. enterocolitica present in the gastrointestinal tract of pigs on the farm, cannot be eliminated throughout theabattoir flowchart and remain in the chambers intended for the cold room.
RESUMO: O objetivo deste estudo foi detectar fontes de contaminação por Yersinia enterocolitica no fluxograma de abate e sua relação com a contaminação na granja. Sessenta suínos foram acompanhados. Foram coletadas amostras de fezes dos animais na granja de origem e durante o abate, diretamente do reto, após a insensibilização. Também foram coletadas amostras da carcaça após a passagem na depiladeira, após a evisceração, antes da entrada na câmara fria, da papada e da água do tanque de escaldagem antes de iniciar o abate e após a passagem dos animais. Os isolados foram obtidos através de análises microbiológicas, identificados por PCR e comparados através de rep-PCR. Yersinia enterocolitica foi isolada de três baias na granja de origem (20%) e de 20 amostras (6,67%) obtidas no fluxograma de abate. Após a rep-PCR, observou-se que os suínos contaminados na granja podem carrear o micro-organismo para diferentes pontos do fluxograma de abate. No entanto, outras fontes de contaminação que não a granja são mais frequentes e diversas. A papada e a carcaça na entrada da câmara fria são os pontos mais críticos. Conclui-se que Y. enterocolitica presente no trato gastrointestinal de suínos na granja pode não ser eliminada ao longo de todo o fluxograma de abate e permanecer na carcaça destinada à câmara fria.
ABSTRACT
O objetivo deste trabalho foi introduzir a técnica de espectrometria de massa com fonte de ionização e dessorção a laser assistida por matriz e analisador de tempo-de-voo (MALDI-TOF) para incrementar o método tradicional microbiológico na detecção de Salmonella spp. e Escherichia coli em carcaças bovinas. Foram avaliadas 270 amostras de 90 carcaças de bovinos. Para isolamento de Salmonella spp. e E. coli, foram utilizadas, respectivamente, as metodologias descritas na ISO 6579:2002 e no Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. As análises por MALDI-TOF foram realizadas a partir de isolados cultivados em ágar nutriente ou em caldo triptona de soja, provenientes das amostras com características bioquímicas positivas (n=7), inconclusivas (n=4) e negativas (n=85) para Salmonella spp. e bioquímicas positivas (n=37) e negativas (n=85) para E. coli. Os perfis de massas foram adquiridos com o espectrômetro de massas MALDI-TOF Autoflex III SmartBeam e os espectros brutos foram processados usando o programa MALDI Biotyper (Bruker Daltonics). De acordo com a identificação preliminar, com base na morfologia das colônias e nas reações bioquímicas, sete isolados foram considerados positivos para Salmonella spp. Através do MALDI Biotyper, esses sete isolados foram classificados como pertencentes ao gênero Salmonella e, além disso, identificados como S. enterica. Quatro isolados que apresentaram características fenotípicas não usuais e resultados inconclusivos nos testes bioquímicos para Salmonella foram identificados como pertencentes aos gêneros Citrobacter e Proteus após análise por MALDI. Para E. coli, 37 amostras foram positivas pelos testes bioquímicos da espécie, o que foi confirmado por MALDI Biotyper. A metodologia MALDI-TOF permitiu a rápida confirmação da identidade de Salmonella spp. e E. coli, podendo ser utilizada para detecção desses microrganismos em isolados bacterianos de carcaças bovinas.(AU)
The aim of this study was to introduce matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) time-of-flight (TOF) mass spectrometry to improve the traditional microbiological method for the detection of Salmonella spp. and Escherichia coli in beef carcasses. Two hundred seventy samples from 90 beef carcasses were evaluated. The methodologies described in ISO 6579:2002 and in the Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods were used for Salmonella spp. and E. coli isolation, respectively. MALDI-TOF analysis were performed on tryptone soya broth suspension isolates or directly from nutrient agar colonies, from the positive, inconclusive or negative biochemically tested samples for Salmonella and E. coli. Mass profiles were acquired on an Autoflex III SmartBeam MALDI-TOF mass spectrometer and the raw spectra were processed using the MALDI Biotyper software (Bruker Daltonics). According to the preliminary identification based on colony morphology and the biochemical reactions, seven isolates were positive for Salmonella spp. Through MALDI Biotyper these seven isolates were also classified as belonging to the genus Salmonella and further identified as S. enterica. Four isolates showing unusual phenotypic characteristics and inconclusive results in biochemical tests for Salmonella were identified as belonging to Citrobacter and Proteus genera after MALDI analysis. Regarding Escherichia coli, 37 were positive for species biochemical testing which MALDI Biotyper confirmed. MALDI-TOF methodology allowed rapid Salmonella spp. and E. coli identity confirmation and may be used to detect these microrganisms within bacterial isolates from beef carcasses.(AU)